尺寸排阻色谱柱是一种基于分子尺寸差异进行分离的高效色谱柱。基于多孔性凝胶作为固定相,利用分子在凝胶孔道中的排阻效应进行分离。在色谱柱中,大分子不能渗透到凝胶孔穴中去而被排阻,较早地流出色谱柱;中等体积的分子部分渗透;小分子则能够完辩渗透入凝胶孔道内,最后流出色谱柱。因此,样品分子基本按其分子大小先后流出,从而达到分离的目的。
尺寸排阻色谱柱的安装过程:
1、连接柱前管道
将色谱柱的入口端与液相色谱仪的泵出口管道牢固连接。一般采用不锈钢管或聚醚醚酮(笔贰贰碍)管进行连接,连接时要确保管道插入色谱柱入口端足够的深度,并且使用合适的扳手拧紧接头,防止在实验过程中发生泄漏。
注意避免过度用力拧紧接头,以免损坏色谱柱入口端的连接部件。可以在接头处适当涂抹一些密封脂,增强密封效果。
2、安装柱头过滤器
在色谱柱入口处安装柱头过滤器,柱头过滤器的作用是防止样品中的颗粒杂质进入色谱柱,造成堵塞。将柱头过滤器放置在色谱柱入口端,然后通过适当的方式(如螺纹连接或卡套连接)将其固定在色谱柱上。
确保柱头过滤器的安装方向正确,并且与色谱柱入口紧密贴合,防止出现死体积过大的情况。
3、连接柱后管道
把色谱柱的出口端与检测器的流通池入口连接起来。同样要使用合适的管道,并保证连接牢固且无泄漏。连接完成后,将柱尾螺母拧紧在色谱柱出口端,以确保密封良好。
在这个过程中,要注意不要让任何杂质进入色谱柱内部,因为即使是微小的杂质也可能影响色谱柱的分离性能。
4、调整色谱柱位置
根据液相色谱仪的结构和使用要求,将安装好色谱柱的流路部分放置在合适的位置。如果是有温控要求的色谱柱,还需要将其安装在温度控制器相应的位置,确保色谱柱能够在设定的温度下工作。
调整色谱柱的位置时,要避免对色谱柱造成碰撞或施加过大的外力,防止色谱柱内部的填料结构受到破坏。